研究方法

1.使用Coriolis μ以300L/min的空氣流量，收集液采用PBS或VTM，體積為15ml，采樣持續(xù)10分鐘。
2.將每個樣本1.2ml無核酸酶水預熱至60°C，持續(xù)2-5分鐘，用于PureYield?結合柱的洗脫。
3.將收集的液體轉移到50ml Falcon管中。大約提取了10ml樣本（對于其他樣本體積，相應地調整蛋白酶溶液、結合緩沖液和異丙醇的體積）。
4.根據表1添加適當體積的蛋白酶溶液。
5.充分混合后，室溫下孵育30分鐘。
7.添加適量的異丙醇，充分混合。
8.按照Maxwell? RSC環(huán)境總核酸試劑盒技術手冊（TM663）第4A節(jié)“提取和純化”步驟，繼續(xù)進行操作。

研究結果

Maxwell? RSC環(huán)境總核酸試劑盒與Maxwell? RSC儀器成功用于從通過Coriolis μ采集的PBS或VTM空氣樣本中純化可擴增的病毒RNA，這些樣本中加入了滅活的流感B型病毒（FluB）和SARS-CoV-2（圖1）。
RT-qPCR檢測通過Coriolis μ采集的PBS或VTM空氣樣本中的SARS-CoV-2（SC2）和流感B型病毒RNA。空氣樣本使用Coriolis μ在PBS（點）或VTM（方）中收集，并加入滅活病毒，使用高劑量（每個樣本2×10^5個流感B、2×10^4個SARS-CoV-2）或中劑量（高劑量的1:10）。通過Maxwell? RSC儀器使用Maxwell? RSC環(huán)境總核酸試劑盒進行總核酸純化，并進行三次重復。每個洗脫液5μl進行A. GoTaq? Enviro廢水SARS-CoV-2雙靶標系統(tǒng)（E和N2）或B. GoTaq? Enviro RT-qPCR系統(tǒng)（Cat.# AM2010）與流感B型引物的擴增。
同樣，Maxwell? RSC環(huán)境總核酸試劑盒和Maxwell? RSC儀器成功用于從PBS中采集的空氣樣本中純化細菌DNA。純化的DNA通過16S V3/V4宏基因組測序進行分析。加入微生物群體標準時，檢測到預期的細菌物種和屬（圖2）。此外，一些文獻中僅在空氣樣本中發(fā)現的細菌屬，包括Acinetobacter、Brevibacterium、Brevundimonas、Corynebacterium、Dermacoccus、Enhydrobacter、Kocuria、Micrococcus、Pseudomonas、Rhizobium、Streptococcus，以及本研究中獨有的Gardnerella、Nesterenkonia和Stenotrophomonas也在本研究中檢測到。
從空氣樣本中純化的細菌DNA的分類分布。空氣樣本使用Coriolis μ在PBS中采集，加入75μl ZymoBIOMICS?腸道微生物群標準進行加樣。通過Maxwell? RSC儀器使用Maxwell? RSC環(huán)境總核酸試劑盒進行總核酸純化。使用GoTaq?長PCR主混合物（Cat.# M4021）進行所有擴增步驟，并使用ProNex?尺寸選擇性純化系統(tǒng)（Cat.# NG2001）進行所有純化步驟。測序文庫的制備遵循Illumina 16S宏基因組測序文庫制備指南，使用ProNex? NGS文庫定量試劑盒（Cat.# NG1201）進行文庫定量。文庫標準化并合并，使用Illumina MiSeq儀器進行測序，并采用V3 600-cycle試劑盒。使用mothur（Schloss, P.D.等，2009）生物信息學數據處理軟件對數據進行分析。

結論

結果表明，Maxwell? RSC環(huán)境總核酸試劑盒和Maxwell? RSC自動核酸提取儀成功地從通過Coriolis μ采集的空氣樣本中純化了病毒RNA和細菌DNA。通過RT-qPCR檢測確認了SARS-CoV-2和流感B型病毒的存在，而細菌DNA則通過宏基因組測序進行分析，揭示了空氣樣本中常見的細菌種類。                
本研究強調了Coriolis μ采樣器在病原體檢測中的應用潛力，并展示了分析方法的穩(wěn)健性，預示著環(huán)境監(jiān)測的前景。